Metody a postupy IVF
PRŮBĚH LÉČBY PŘI KLASICKÉ STIMULACIIVF (in vitro fertilizace, mimotělní oplození) — v češtině se pro tuto metodu vžilo označení „oplodnění ve zkumavce“. Ke spojení mužské spermie a ženského vajíčka dochází v laboratoři, mimo tělo ženy.
- Při klasickém IVF oplození se do kultivační misky k odebraným vajíčkům přidá přesná koncentrace zpracovaných spermií. Miska se uloží do inkubátoru a k oplození dochází spontánně. Nejrychlejší spermie aktivním pohybem sama pronikne přes obaly vajíčka a vajíčko oplodní. Oplození je podobné jako u přirozeného početí. Tato metoda ale může selhat, a to i v případě, kdy je spermiogram v normě, a dokonce i tehdy, když daný pár již má dítě počaté přirozeně.
- ICSI (Intra Cytoplasmatic Sperm Injection) – intracytoplazmatická injekce spermie do vajíčka. Metoda oplození, kdy embryolog za použití mikromanipulátoru zavede vybranou spermii pomocí skleněné mikropipety přímo do vajíčka.
Metoda ICSI je vhodná
- především při mužské příčině neplodnosti (snížený počet spermií, zhoršená pohyblivost spermií apod.)
- po operativním získání spermií (MESA, TESE)
- při nízkém počtu vajíček
- u imunologických příčin neplodnosti
- při použití kryokonzervovaných spermií/vajíček
- při použití dárcovských spermií či vajíček
- při nutnosti genetického vyšetření embryí
- pro zvýšení pravděpodobnosti oplození
Metoda má velmi vysokou úspěšnost. Předchází se tak nečekanému selhání oplození a umožní se maximální využití získaných vajíček.
Pro výběr spermií k oplození vajíček je možno využít mikrofluidní čip (MSS — Microfluidic sperm sorting chip).
Metoda vychází z principu přirozeného výběru a napodobuje selekci spermií při průchodu vejcovody. Při této metodě se spermie vytřídí průchodem přes mikrobariéry.
Vytříděné spermie po použití mikročipu vykazují lepší morfologii a pohyblivost. Na rozdíl od klasického zpracování metodou centrifugace mají také nižší fragmentaci DNA a nižší hladiny reaktivních forem kyslíku, které mohou nepříznivě ovlivňovat kvalitu spermií.
Použití mikročipu vede ke zvýšení pravděpodobnosti oplození, správného vývoje embrya, otěhotnění a narození zdravého dítěte.
Selekce spermií pomocí mikrofluidního čipu se používá pro všechny metody oplození vajíček (IUI, ICSI i konvenční IVF).
Kultivace bezprostředně navazuje na oplodnění vajíček. Oplozením vajíčka vznikne embryo. Embrya jsou v laboratoři kultivována v inkubátoru 2 — 6 dnů. Každý den je posouzen a zhodnocen jejich vývoj.
- Den 1 - hodnocení oplození (obr. Den 1)
- Den 2 - hodnocení prvního a druhého dělení buněk, 2 – 4 buněčné embryo (obr. Den 2)
Prodloužená kultivace (od 3. dne)
Standartně doporučujeme prodlouženou kultivaci embryí v kultivačním systému laboratoře, nejlépe do 4. — 6. dne kultivace. Tato doba kultivace umožňuje určit správně se vyvíjející embrya od embryí s pomalým nebo chybným vývojem, a transferovat tak do dělohy ženy ta nejkvalitnější embrya s největší šancí na uhnízdění v děložní sliznici.
- Den 3 - embryo 6 – 8 buněk, první den prodloužené kultivace (obr. Den 3)
- Den 4 - embryo ve stádiu moruly (obr. Den 4)
- Den 5 – 6 - embryo ve stádiu blastocysty, poslední den, kdy je možno provést embryotransfer nebo zamrazení embrya (obr. Den 5)
EmbryoGlue®
EmbryoGlue® je speciální médium určené pro embryotransfer. Obsahuje vysokou koncentraci hyaluronanu a nízkou koncentraci rekombinantního lidského albuminu. Je vyvinuto tak, aby napodobilo podmínky v ženské děloze a pomohlo embryím v implantaci (zahnízdění) po přenosu do dělohy.
Použití EmbryoGlue zvyšuje úspěšnost otěhotnění o 5 — 10 %.
EmbryoGlue® je vhodné pro embryotransfer všech vývojových stádií embryí (od dvoudenních až po blastocytu pátý den vývoje), a to pro čerstvá embrya i embrya po rozmrazení.
Zamrazení embryí — kryokonzervace (vitrifikace)
Jedno, maximálně dvě embrya jsou přenesena do dělohy. Ostatní kvalitní embrya, která jsou k dispozici, můžeme zamrazit pro pozdější použití.
Kryokonzervaci embryí lze použít i pokud je z nějakých důvodů nutno odložit transfer. Stává se tak ze zdravotních důvodů (např. sliznice dělohy není optimální pro transfer) nebo pokud jsou embrya vyšetřována geneticky a je nutné počkat na výsledek testů.
Moderní technikou kryokonzervace, kterou využíváme, je vitrifikace, při které dochází ke skokovému ochlazení reprodukčních buněk na teplotu -196 °C při použití kryoprotektivních látek chránících buňky před poškozením.
Zamrazená embrya se uchovávají v kapalném dusíku při teplotě -196 °C
Úspěšnost transferů kryokonzervovaných embryí je srovnatelná s přenosem čerstvých embryí.
Zamrazení vajíček — kryokonzervace (vitrifikace)
Pokročilé ultrarychlé mrazení (vitrifikace) dovoluje uchovávat také vajíčka. Jedná se o velmi šetrnou metodu, která zachovává vysokou kvalitu vajíček pro pozdější umělé oplodnění. Kryokonzervace vajíček je v současnosti běžnou součástí léčby neplodnosti.
Doporučení reprodukční medicíny je, aby si všechny ženy starší 32 let, které v brzké době neplánují těhotenství, zamrazily svá vajíčka.
Zamrazení spermií — kryokonzervace
Zmrazení nám umožňuje zakonzervovat mužské pohlavní buňky pro budoucí použití.
Kryokonzervace spermií se provádí klasickou metodou s pomalým poklesem teploty a s použitím kryoprotektivních látek chránících buňky před poškozením.
Spermie jsou uchovány v kapalném dusíku při teplotě –196 °C. Lze je skladovat po mnoho let bez negativního vlivu na jejich kvalitu. Toto je spolehlivý způsob, jak zachovat mužskou plodnost.
